PCR test: jak funguje a co ukazuje? 4.67/5 (6)

PCR test je molekulárně biologické vyšetření, které slouží k identifikaci specifického genetického materiálu. Zkratka PCR znamená polymerázová řetězová reakce. Test se využívá nejen při diagnostice infekčních onemocnění, ale také v genetice, onkologii, mikrobiologii, forenzní analýze a vědeckém výzkumu.

Na rozdíl od antigenních nebo protilátkových testů PCR nehodnotí imunitní odpověď organismu, ale přímo přítomnost genetické informace hledaného původce nebo genetické změny.

Jak PCR test funguje?

Princip PCR spočívá v laboratorním namnožení konkrétního úseku genetického materiálu. Pokud je cílová DNA nebo RNA ve vzorku přítomna, dochází během reakce k jejímu opakovanému kopírování, což umožní její následnou detekci.

1. Denaturace: genetický materiál se zahřeje, aby došlo k oddělení jednotlivých vláken DNA.
2. Nasednutí primerů: krátké sekvence DNA se navážou na přesně určené místo cílového úseku.
3. Elongace: enzym DNA polymeráza vytvoří nové kopie cílové sekvence.

Tyto kroky se opakují v několika desítkách cyklů, čímž se genetický materiál exponenciálně namnoží do množství, které lze laboratorně vyhodnotit.

Co ukazuje PCR test

PCR test ukazuje přítomnost konkrétního genetického materiálu ve vzorku. Výsledek závisí na tom, na jaký cíl je test zaměřen. Nejčastěji se používá k průkazu infekčních agens nebo genetických změn.

• přítomnost virové RNA nebo DNA,
• přítomnost bakteriální DNA,
• genetické mutace nebo varianty,
• množství virové nálože,
• monitorování účinnosti léčby.

Rozdíl mezi PCR testem a antigenním testem

PCR test detekuje genetický materiál, zatímco antigenní test vyhledává specifické bílkoviny patogenu. PCR test je obecně citlivější a přesnější, protože dokáže zachytit i velmi malé množství genetického materiálu.

• PCR test má vyšší citlivost a specificitu.
• Antigenní test poskytuje rychlejší výsledek.
• PCR test se zpravidla vyhodnocuje v laboratoři.
• Antigenní test je vhodný zejména pro rychlé orientační testování.

Když je PCR test pozitivní

Pozitivní PCR test znamená, že ve vzorku byl detekován hledaný genetický materiál. U infekčních onemocnění to obvykle potvrzuje přítomnost konkrétního viru nebo bakterie.

Výsledek je však vždy nutné interpretovat v souvislosti s klinickým stavem pacienta, časem odběru, kvalitou vzorku a dalšími laboratorními nálezy.

Když je PCR test negativní

Negativní PCR test znamená, že ve vzorku nebyl nalezen hledaný genetický materiál. Negativní výsledek však nemusí vždy zcela vyloučit přítomnost onemocnění.

Falešně negativní výsledek

Falešně negativní výsledek může být způsoben například příliš časným odběrem, nízkým množstvím patogenu, nesprávnou technikou odběru nebo nevhodným typem vzorku.

RT-PCR test

RT-PCR je metoda používaná pro detekci RNA. Protože standardní PCR pracuje s DNA, je nutné RNA nejprve přepsat do komplementární DNA pomocí procesu zvaného reverzní transkripce.

RT-PCR se často používá při diagnostice RNA virů, například respiračních virových infekcí.

Co je real-time PCR nebo qPCR?

Real-time PCR, označovaná také jako qPCR, umožňuje sledovat průběh amplifikace genetického materiálu v reálném čase. Tato metoda dokáže nejen potvrdit přítomnost cílového materiálu, ale také odhadnout jeho množství ve vzorku.

Co znamená Ct hodnota u PCR testu?

Ct hodnota představuje počet amplifikačních cyklů potřebných k detekci genetického materiálu. Nižší Ct hodnota obvykle znamená vyšší množství cílového materiálu ve vzorku.

• nízké Ct může znamenat vysokou virovou nálož,
• vyšší Ct může odpovídat menšímu množství genetického materiálu,
• velmi vysoké Ct bývá často blízko hranice detekce testu.

Jak probíhá PCR test

PCR test začíná odběrem biologického materiálu. Typ vzorku závisí na konkrétním vyšetření. Nejčastěji jde o výtěr z nosohltanu, krev, sliny, moč nebo jiný biologický materiál.

1. odběr biologického vzorku,
2. transport vzorku do laboratoře,
3. izolace genetického materiálu,
4. provedení PCR reakce,
5. vyhodnocení laboratorního výsledku.

Výsledek PCR testu – za jak dlouho?

Doba vyhodnocení PCR testu závisí na typu vyšetření, kapacitě laboratoře a logistice transportu vzorků. Výsledek může být dostupný během několika hodin, v běžném provozu však často následující den.

Kdy se PCR test používá – jaké nemoci pomůže odhalit

PCR test se využívá v celé řadě medicínských oborů. Nejčastěji slouží k potvrzení infekčních onemocnění, genetických poruch nebo sledování účinnosti léčby.

• diagnostika virových infekcí,
• diagnostika bakteriálních infekcí,
• genetická vyšetření,
• onkologická diagnostika,
• monitorování virové nálože,
• forenzní genetika.

PCR test se využívá k diagnostice široké škály infekčních i genetických onemocnění. Dokáže odhalit virové infekce, jako jsou covid-19, chřipka, respirační syncyciální virus (RSV), hepatitida B a C, HIV nebo lidský papilomavirus (HPV). V bakteriologii se používá například k průkazu černého kašle, tuberkulózy, chlamydiových infekcí či kapavky. PCR testy nacházejí uplatnění také při diagnostice některých parazitárních a plísňových onemocnění. Kromě infekcí se využívají v genetice k odhalování dědičných chorob a v onkologii k identifikaci specifických genetických mutací spojených s nádorovými onemocněními nebo ke sledování účinnosti léčby.

PCR test někdy může být falešně pozitivní

Falešně pozitivní výsledek je možný, i když při správném laboratorním postupu nebývá častý. Příčinou může být kontaminace vzorku, laboratorní chyba nebo přetrvávání genetického materiálu po prodělané infekci.

Může být PCR test falešně negativní?

Falešně negativní výsledek může vzniknout při nízkém množství genetického materiálu, nesprávném odběru nebo nevhodném načasování testu. Výsledek je proto vždy nutné hodnotit v souvislosti s klinickým stavem pacienta.

Hlavní výhody PCR testu?

• vysoká citlivost,
• vysoká specificita,
• schopnost zachytit minimální množství genetického materiálu,
• široké využití v medicíně i výzkumu,
• možnost kvantifikace genetického materiálu.

Limity PCR testu

• výsledek hodně závisí na kvalitě odběru,
• test nemusí zachytit velmi časnou infekci,
• může detekovat i zbytky genetického materiálu po prodělané infekci,
• vyžaduje laboratorní vybavení a odborné zpracování.

Příprava na PCR test

Příprava závisí na typu odběru. U výtěru z nosu nebo krku bývá doporučeno krátce před odběrem nejíst, nepít, nekouřit a nepoužívat ústní vody nebo nosní spreje.

Pacient by měl vždy dodržovat pokyny konkrétní laboratoře nebo odběrového místa.

A když shrnu informace o PCR testu

PCR test představuje vysoce přesnou molekulárně biologickou metodu, která umožňuje detekci konkrétního genetického materiálu. Díky vysoké citlivosti a širokému využití patří mezi základní nástroje moderní laboratorní diagnostiky.

• PCR detekuje DNA nebo RNA.
• Metoda funguje na principu mnohonásobného kopírování genetického materiálu.
• Pozitivní výsledek potvrzuje přítomnost hledaného genetického materiálu.
• Výsledek je vždy nutné interpretovat v klinickém kontextu.
• PCR test má široké využití v infekční medicíně, genetice i onkologii.

VIDEO: PCR TESTY (Polymerázová řetězová reakce, testy na COVID a jiné)

Studie a zdroje článku

• Clinical comparison and agreement of PCR, antigen, and viral culture for the diagnosis of COVID-19 Autoři: Amanda Agard, Omar Elsheikh, Drew Bell

Autor článku

Daniel Borník (více o nás)

 

Dan miluje sport. Přispívá články zejména z oblasti regenerace, fyzio, cvičení a píše i o nemocech. Náš tým vám všem chce přinášet zajímavé informace ze světa zdraví, cvičení, výživy, rehabilitace a obecně zdravého životního stylu. Ve většině našich článků vycházíme z odborných studií a lékařských prací. Vždy se snažíme na studie odkazovat, ověříte si tak pravost. Více informací o nás najdete zde - mrkněte na náš tým.

Líbil se vám náš článek? Sdílejte ho, uděláte nám radost

Přečtěte si také naše další články